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invivogen ant-bl-05說明書
Selective antibiotic for the bsr, bls, or BSD genes | 50 mg (5 x 1 ml) 100 mg (10 x 1 ml) 500 mg (50 ml bottle) 500 mg (50 x 1 ml) | ant-bl-05 ant-bl-1 ant-bl-5b ant-bl-5 |
| Blasticidin (powder) | Unit size | Cat. code |
|---|---|---|
Selective antibiotic for the bsr, bls, or BSD genes | 1 g | ant-bl-10p |
殺稻瘟素是一種有效的選擇抗生素，可作用于真核細胞和原核細胞。
殺 稻瘟素是一種從灰色產(chǎn)色鏈霉菌中分離的肽基核苷抗生素，通過干擾核糖體機制中的肽鍵形成來抑制蛋白質(zhì)合成。
對殺稻瘟素的抗性是由蠟狀芽孢桿菌(bsr)的殺稻瘟素抗性基因賦予的，該基因編碼殺稻瘟素-S 脫氨酶 [1]。
來自鏈輪菌[2] 的殺稻瘟素S 乙酰轉(zhuǎn)移酶基因 (bls)和來自土曲霉[3]的殺稻瘟素 S 脫氨酶基因 (BSD)也賦予了對殺稻瘟素的抗性。
通常，哺乳動物細胞對 1-10 µg/ml 的殺稻瘟素濃度和細菌對 25-100 µg/ml 的濃度敏感。
由殺稻瘟素誘導(dǎo)的細胞死亡迅速發(fā)生，允許在一周內(nèi)選擇攜帶殺稻瘟素抗性基因的轉(zhuǎn)染細胞系。
參考：
1. Izumi M. 等人，1991. 殺稻瘟素 S 抗性基因 (bsr)：哺乳動物細胞的新選擇標記。Exp.Cell Res.197:229-33。
2. Perez-Gonalez J. 等人，1990 年。編碼來自鏈輪菌屬的殺稻瘟素 S 乙酰轉(zhuǎn)移酶的基因的克隆和表征。基因。86:129-34。
3. Kimura M. 等人，1994. 土曲霉 (BSD) 中的殺稻瘟素 S 脫氨酶基因：一種用于轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞的新耐藥基因。生物化學(xué)。生物物理學(xué)。學(xué)報。1219:653-9。
殺稻瘟素產(chǎn)品濃度： 10 mg/ml
質(zhì)量控制：每個批次都經(jīng)過*測試，以確保沒有批次間的差異。
純度： ≥ 95% (HPLC)
內(nèi)毒素水平： < 1 EU/mg
理化特性： pH值、外觀
細胞培養(yǎng)測試：在殺稻瘟素敏感和抗稻瘟素的哺乳動物細胞系中驗證了效力
痕量污染物的非細胞毒性：在殺稻瘟素抗性細胞中證實沒有長期影響
殺稻瘟素鹽酸鹽以無菌過濾溶液的形式提供，濃度為 10 mg/ml，溶于 HEPES 緩沖液。
該產(chǎn)品有四種包裝尺寸：
ant-bl-05： 5 x 1 毫升（50 毫克）
ant-bl-1： 10 x 1 毫升（100 毫克）
ant-bl-5： 50 x 1 毫升（500 毫克）
ant-bl-5b： 1 x 50 毫升（500 毫克）
殺稻瘟素鹽酸鹽也以粉末形式提供：
ant-bl-10p： 1 克（粉末）
殺稻瘟素在室溫下運輸。
收到后應(yīng)在 4°C 或 -20°C 下儲存。
殺稻瘟素是一種有害化合物。有關(guān)操作說明，請參閱安全數(shù)據(jù)表。
用于哺乳動物細胞系的殺稻瘟素的工作濃度從 1 到 10 μg/ml 不等，在少數(shù)情況下可達 30 μg/ml。
在開始實驗中，我們建議確定殺死宿主細胞系所需的最佳抗生素濃度。
處理后，細胞死亡迅速發(fā)生，允許在轉(zhuǎn)染后短短 7 天內(nèi)選擇帶有bsr或 BSD 基因的質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染細胞。
下面列出了在哺乳動物細胞的一些例子中選擇的殺稻瘟素的建議濃度。
細胞系 | 中等的 | 殺稻瘟素濃 | 參考 |
|---|---|---|---|
CHO（中國倉鼠卵巢細胞） | DMEM | 5-10 微克/毫升 | 1,2 |
| HEK293（人胚胎腎細胞） | DMEM | 5-15 微克/毫升 | 3、4 |
| HeLa（人類子宮細胞） | DMEM | 2.5-10 微克/毫升 | 5、6 |
| Neuro2a（小鼠成神經(jīng)細胞） | DMEM | 30微克/毫升 | 7 |
| THP-1（人類單核細胞） | RPMI | 10 微克/毫升 | 8 |
參考：
1. Dorgham K. 等人，2009 年。一種具有抗炎活性的工程化 CX3CR1 拮抗劑。J Leukoc 生物學(xué)。86（4）：903-11。
2. Le Bon L. 等人，2014 年。邊緣蛋白調(diào)節(jié) Notch-配體順式和反式相互作用以信號狀態(tài)。eLife Sci，3：e02950。
3. Tomecki R. 等人，2014 年。多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)的 hDIS3 突變導(dǎo)致細胞 RNA 代謝紊亂，并建議 hDIS3 PIN 域作為潛在的藥物靶點。核酸研究。42:1270-90。
4. Edbauer D. 等，2004。nicastrin 和早老素的共表達挽救了 APH-1.J Biol Chem 的功能喪失突變體。279:37311-5。
5. Khandelia P. 等人，2011 年。用于培養(yǎng)哺乳動物細胞中短發(fā)夾 RNA 干擾和轉(zhuǎn)基因的流線型平臺。PNAS 108:12799-804。
6. Lee HK.et al., 2007. β-內(nèi)酰胺酶互補在 Toll 樣受體信號抑制劑的高通量篩選中的應(yīng)用。摩爾藥學(xué)。72:868-75。
7. Matsumoto G. 等人，2011。p62/SQSTM1 的絲氨酸 403 磷酸化調(diào)節(jié)泛素化蛋白的選擇性自噬清除。摩爾細胞。44:279-89。
8. Schepetkin IA。et al., 2009. 從 Epilobium angustifolium 中分離的 oenothein B 的免疫調(diào)節(jié)活性。J免疫學(xué)。183:6754-66。
殺稻瘟素的儲存方法是什么？
殺稻瘟素在室溫下運輸。收到后，應(yīng)在 4°C 下短期儲存或在 -20°C 下長期儲存。避免重復(fù)的凍融循環(huán)。有效期在產(chǎn)品標簽上注明。
殺稻瘟菌素溶液打開后，可在 -20°C 下保持穩(wěn)定 1 年，避免重復(fù)凍融循環(huán)，如果保存在無菌條件下，可在 4°C 下保存 3 個月。
具體而言，對于殺稻瘟素粉末，原液濃度必須為 10 mg/ml，等分試樣可在 -20°C 下保存 1 年。請注意，如果等分試樣的濃度低于 10 mg/ml，我們無法保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。重要的是，避免重復(fù)的凍融循環(huán)。
殺稻瘟素在哺乳動物細胞中的選擇濃度是多少？
用于哺乳動物細胞系的殺稻瘟素的工作濃度在 1 - 10 μg/ml 之間變化，少數(shù)報道的案例高達 30 μg/ml。在初始實驗中，我們建議確定殺死宿主細胞系所需的殺稻瘟素的最佳濃度。
有關(guān)更多詳細信息，請參閱該產(chǎn)品的技術(shù)數(shù)據(jù)表。
大腸桿菌中殺稻瘟素的選擇濃度是多少？
殺稻瘟素在大腸桿菌中的活性較低，但可以在補充有 100 μg/ml 殺稻瘟素的低鹽 LB 瓊脂培養(yǎng)基 (pH 8) 上選擇對殺稻瘟素有抗性的轉(zhuǎn)化體。
請注意：高 pH 值（即 8）會增強殺稻瘟素的活性。
