Immunohistochemistry Workflow

vectorlabs免疫組織化學(xué)工作流程

自1976年以來，Vector Laboratories一直處于開發(fā)創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)室檢測試劑的前沿。該VECTASTAIN ^® ABC系統(tǒng)的建立我們在免疫組織化學(xué)（IHC）的和免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC），而我們在這些領(lǐng)域仍然是一個(gè)值得信賴的名字。我們的產(chǎn)品以其高靈敏度，低背景，可靠性，可重復(fù)性和價(jià)值定價(jià)而*。我們提供許多不同的檢測系統(tǒng)，以適應(yīng)廣泛的實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)。

為IHC分析選擇合適的試劑是優(yōu)化方案的重要組成部分。在IHC工作流程的每個(gè)步驟中，Vector Laboratories都是您提供優(yōu)質(zhì)標(biāo)簽和檢測產(chǎn)品的資源。

• 組織切片在玻片上的保留和粘附。
• 劃定并隔離各個(gè)部分以減少試劑使用量或進(jìn)行離散處理。

抗原提取

用確定的pH和鹽溶液增加醛固定的制劑中的組織抗原性（“免疫反應(yīng)性”）。醛固定（例如，福爾馬林）和石蠟包埋過程中的熱暴露相結(jié)合，可能會使表位難以檢出。在抗原回收過程中，將組織用緩沖溶液和高溫處理，這會導(dǎo)致暴露抗原以進(jìn)行檢測的蛋白質(zhì)構(gòu)象變化。

第三步：淬火/阻止

使用封閉液減少或消除組織切片和細(xì)胞制劑上不需要的背景（非特異性）染色。非特異性染色可以由內(nèi)源性酶或組織成分引起，包括內(nèi)源性酶活性，F(xiàn)c受體的存在或檢測試劑與組織或細(xì)胞蛋白和其他大分子的相互作用。根據(jù)陰性對照部分的結(jié)果選擇阻斷解決方案。

 第四步：

一抗/凝集素

使用特定的經(jīng)過驗(yàn)證的標(biāo)記物鑒定和定位細(xì)胞或組織制劑中的目標(biāo)蛋白抗原或糖蛋白部分。選擇一抗或凝集素時(shí)，請考慮組織種類和組織制備方法（例如固定），以確保與靶標(biāo)的特異性結(jié)合。

 第五步：

二抗

選擇高純度和結(jié)合的檢測試劑，以滿足檢測條件，例如一抗種類，組織種類，靶標(biāo)豐度和易用性（濃縮或即用型）。

 第六步：

三級試劑

如果需要，可以提高檢測靈敏度，以可視化弱或瞬時(shí)表達(dá)，上調(diào)或未知（例如基因敲入研究）的抗原。

 第七步:

底物/色原

使用酶特異性發(fā)色顯色劑可視化目標(biāo)蛋白抗原及其細(xì)胞和/或細(xì)胞外定位以及相對表達(dá)水平。選擇符合您的顏色偏好并且與其他系統(tǒng)試劑兼容的酶底物（例如，復(fù)染，固定介質(zhì)和其他底物，如果是多路復(fù)用的話）。

 第八步：

復(fù)染

使用對比核染色劑來闡明異質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)內(nèi)的目標(biāo)抗原信號。這有助于闡明組織中的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和特定的染色模式。選擇與您的酶底物形成對比并與底物和固定介質(zhì)化學(xué)相容的復(fù)色（藍(lán)色，綠色或紅色）。

 第九步：

蓋玻片/安裝

保留目標(biāo)抗原染色劑用于短期或無限期存儲和存檔。選擇與您的基材和復(fù)染都兼容的安裝介質(zhì)。使用非水性安裝介質(zhì)來安裝要存檔的幻燈片，或使用水性安裝介質(zhì)來存儲長達(dá)幾年。