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prokazyme dlig120說(shuō)明書

 更新時(shí)間:2020-04-21 點(diǎn)擊量:968

prokazyme dlig120說(shuō)明書

Rma DNA ligase from Rhodothermus marinus

 €220,00 – €320,00

A thermostable NAD+ dependent double-stranded DNA ligase with broad temperatures range between 5 and 65°C. 


UNIT SIZE AND PRICE 

海藻的Rma DNA連接酶

 € 220,00 – € 320,00

耐高溫NAD +依賴的雙鏈DNA連接酶,溫度范圍在5到65°C之間。 

描述

dlig120來(lái)自海生紅球藻的 DNA連接酶是一種熱穩(wěn)定的NAD +依賴性雙鏈DNA連接酶,溫度范圍介于5至65°C之間。所述enzym DNA的具有高保真Ë催化結(jié)扎并適合于各種應(yīng)用,包括基因合成。

 

產(chǎn)品Dlig120 Rma DNA連接酶可提供500單位和2000單位,以及10x反應(yīng)緩沖液。

–一周內(nèi)發(fā)貨,除了以下所列價(jià)格外,還要支付其他運(yùn)輸和手續(xù)費(fèi)。  

 

商品名:Dlig120S | DNA連接酶500單位| 價(jià)格:220.00 EUR

 

 

商品名:Dlig120L | DNA Ligase 2000單位| 價(jià)格:320.00 EUR

 

 

產(chǎn)品描述

介紹:

Rma DNA連接酶催化雙鏈DNA結(jié)構(gòu)中相鄰3′-羥基和5′-磷酸末端的NAD依賴性連接。與T4 DNA連接酶相反,Rma DNA連接酶對(duì)平末端DNA的片段沒有可檢測(cè)的活性。與T4 DNA連接酶不同,Rma DNA連接酶在溫度條件下僅顯示4 bp和2 bp的共粘性末端的小連接活性。Rma DNA連接酶對(duì)RNA靶沒有活性。從帶有質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中分離和純化Rma DNA連接酶,該質(zhì)粒帶有克隆的DNA連接酶基因,該基因來(lái)自冰島分離的嗜熱細(xì)菌Rhodother-mus marinus(1、2)。Rma連接酶在91°C下的半衰期為7分鐘(2)。該酶具有廣泛的反應(yīng)溫度范圍,活性約為55°C。

應(yīng)用范圍:

Tsc DNA連接酶是需要高溫,高嚴(yán)格性的雙鏈DNA連接的理想酶.Tsc DNA連接酶可用于:

  • 來(lái)自重疊寡核苷酸的基因合成(12)。

 

儲(chǔ)存:
儲(chǔ)存和稀釋緩沖液:20 mM Tris-HCl,50 mM KCl,0.1 mM EDTA,0.1%Triton X-100(v / v),1 mM二硫蘇糖醇(DTT),50%甘油(v / v),pH 7.6(25℃)。當(dāng)在–15°C至-25°C下儲(chǔ)存時(shí),Rma DNA連接酶是穩(wěn)定的。

反應(yīng)條件:
1 x反應(yīng)緩沖液(已提供10 x)20 mM Tris-HCl,20 mM KCl,10 mM MgCl2、0.1%Nonidet P40(v / v),0.5 mM NAD,1 mM DTT,pH 7 ,5(25°C)。

濃度和單位定義
濃度10 U /μl。1個(gè)單位的Rma DNA連接酶在45°C下在1分鐘內(nèi)催化1μgBstEII消化的λDNA的cos位點(diǎn)的50%連接。


應(yīng)用方案:活性測(cè)定: 用于單位定義的酶測(cè)定是連接用BstII消化的λDNA的cos位點(diǎn)。

 

零件體積終濃度
反應(yīng)緩沖液(10x)2.0微升1個(gè)
λDNA(已消化BstEII)X微升1微克
Tsc DNA連接酶稀釋系列 
加入無(wú)菌水高達(dá)20,0μl 
20,0微升 

在45°C孵育1-15分鐘,在干冰/乙醇浴中停止反應(yīng)。在瓊脂糖凝膠上分析之前,在65°C下孵育10分鐘(融解未連接的cos位點(diǎn))

通過瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色測(cè)定結(jié)果。

質(zhì)量控制:

質(zhì)量控制:
如下所述測(cè)定每批Tsc DNA連接酶的活性和污染活性。

缺少DNA核酸內(nèi)切酶:

  • 將0.25μg超螺旋pBR322 DNA與遞增量的Tsc DNA連接酶在25μl反應(yīng)中于37°C孵育16小時(shí)。大于100 U的Tsc DNA連接酶顯示pBR322 DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)沒有松弛。
  • 在37℃和64℃下,在25 µl反應(yīng)中用Tsc DNA連接酶誘導(dǎo)加入0.25 µgλ-DNAEco RI / HindIII片段16 h。100 U的Tsc DNA連接酶顯示未改變條帶模式。

核酸外切酶的缺失:將
越來(lái)越多的Tsc DNA連接酶在50μl含有[3H]標(biāo)記的DNA的測(cè)試緩沖液中于37°C和64°C孵育4小時(shí)。顯示無(wú)核酸外切酶活性的酶量> 100U。

缺少Rnases:
根據(jù)制造商協(xié)議,使用Ambion的RNaseAlertTM Lab Test Kit(目錄號(hào)1964)檢測(cè)RNase活性。1小時(shí)后,在37°C下孵育XU Tsc DNA連接酶后,未檢測(cè)到RNase活性。

參考文獻(xiàn):

  • Alfredsson GA等。1988.微生物學(xué)雜志。134:299-306
  • Torbjarnardottir SH等。1995.基因161:1-6
  • Housby JN等。2000。核酸研究。28:e10。
  • Housby JN等。2001。肛門。生化。302:88-94
  • Sutton JR等。1992.轉(zhuǎn)基因研究1:228

附加信息

單位大小和價(jià)格

500臺(tái)– 220歐元,2000臺(tái)– 320歐元