Cytoskeleton，Inc。很高興為藥物篩選，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專(zhuān)注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒，以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過(guò)程。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎(chǔ)研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。

除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品，我們還在產(chǎn)品線(xiàn)中為微管，微管蛋白，運(yùn)動(dòng)蛋白，小G蛋白效應(yīng)物，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。

Binding Proteins

結(jié)合蛋白質(zhì)

· 概述

· 關(guān)于

· CITATIONS

· 常見(jiàn)問(wèn)題解答

肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用
*，F(xiàn)-和G-肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用（14）??。目前有超過(guò)150種已知的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（ABP），其占細(xì)胞蛋白的約25％。ABP在肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架上賦予大量功能多樣性，其涉及諸如肌肉收縮，唇形突破，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，胞質(zhì)分裂和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)的過(guò)程。研究這些過(guò)程如何調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白絲功能和動(dòng)力學(xué)是一個(gè)重要且不斷增長(zhǎng)的研究領(lǐng)域。

可以通過(guò)使用生物化學(xué)，遺傳學(xué)和免疫學(xué)方法分離和研究肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。因?yàn)榇嬖诔^(guò)50種類(lèi)型的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，所以用于鑒定它們的方法及其功能/活性也是多種多樣的。肌動(dòng)蛋白親和柱通常用于親和純化ABP，無(wú)論它們是F-或G-肌動(dòng)蛋白結(jié)合?？梢酝ㄟ^(guò)利用芘肌動(dòng)蛋白熒光的聚合增強(qiáng)來(lái)進(jìn)行顯示潛在ABP影響肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)的簡(jiǎn)單測(cè)定（參見(jiàn)測(cè)量肌動(dòng)蛋白聚合物部分）。這種性質(zhì)的研究有助于鑒定新的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。有幾篇值得一讀的關(guān)于識(shí)別和量化新肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的可能方法的評(píng)論（15,16,17）?

問(wèn)題1：哪種肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（ABP）可用作F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合對(duì)照？ 

答案1：肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白α-輔肌動(dòng)蛋白（Cat。＃AT01）是一種F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合和交聯(lián)蛋白，使其可用作F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合研究的對(duì)照。它的Kd是1μM，這意味著在該濃度下發(fā)生50％結(jié)合。因此，我們的目標(biāo)是使用 2μM的α-肌動(dòng)蛋白作為結(jié)合測(cè)定中的陽(yáng)性對(duì)照。在結(jié)合反應(yīng)中，2μM濃度的α-輔肌動(dòng)蛋白相當(dāng)于0.23μg/μl。此外，α-輔肌動(dòng)蛋白對(duì)pH敏感，其高親和力發(fā)生在pH 7.0。

問(wèn)題2：Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌動(dòng)蛋白活力？ 

答案2：遺憾的是，我們不會(huì)出售運(yùn)動(dòng)級(jí)肌球蛋白或重肌紅蛋白用于肌動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)。我們發(fā)現(xiàn)質(zhì)量控制測(cè)試非常難以復(fù)制，因此我們無(wú)法充分確保試劑的質(zhì)量。因此，肌球蛋白（Cat。＃MY02和MY03）和重型meromyosin蛋白（Cat。＃MH01）不推薦用于F-肌動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)測(cè)定。已經(jīng)測(cè)試過(guò)這些試劑的客戶(hù)在運(yùn)動(dòng)方面沒(méi)有取得很好的成功，因此我們不建議購(gòu)買(mǎi)樣品進(jìn)行測(cè)試。如果需要運(yùn)動(dòng)級(jí)肌動(dòng)蛋白或重型meromyosin，我們建議遵循原始方案（Kron和Spudich，1985）并在液氮中冷凍100μl等分試樣以確保穩(wěn)定性。

    參考文獻(xiàn)：  SJ Kron和JA Spudich，1985年。熒光肌動(dòng)蛋白絲在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移動(dòng)。PNAS，83,6272-6276。

肌動(dòng)蛋白（純度> 99％）：牛心肌

1x1毫克（Cat。＃AD99-A）

5x1毫克（Cat。＃AD99-B）

產(chǎn)品用途包括

· 鑒定和表征心肌肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白

· 體外心肌肌動(dòng)蛋白聚合研究

材料：
牛心肌肌動(dòng)蛋白作為凍干粉末提供。當(dāng)一個(gè)小瓶在1ml肌動(dòng)蛋白單體緩沖液復(fù)原：5.0毫摩爾Tris-HCl pH 8.0中，0.2毫米氯化鈣₂，0.2mM的ATP和0.5mM DTT，它是在1.0毫克/毫升的終濃度。

純度：
通過(guò)在SDS-PAGE凝膠上掃描蛋白質(zhì)的光密度測(cè)定來(lái)確定純度。樣品純度> 99％。

生物活性：
生物活性以三種方式確定。種方法利用芘肌肉肌動(dòng)蛋白作為聚合的熒光指示劑（使用1:10比例的AP05至AD99）。第二種是通過(guò)高速離心沉淀肌動(dòng)蛋白聚合物。第三種方法通過(guò)特異性抑制DNase活性來(lái)測(cè)量單體的完整性。生物活性> 90％。

問(wèn)題1：牛心肌肌肉肌動(dòng)蛋白的同種型組成是什么？

答案1：  牛心肌肌動(dòng)蛋白（Cat。＃AD99）由84％的α-心肌細(xì)胞和16％的α-骨骼肌動(dòng)蛋白同種型組成。

問(wèn)題2：當(dāng)心肌肌動(dòng)蛋白沒(méi)有可用的芘結(jié)合物時(shí)，如何用芘測(cè)定法測(cè)量肌動(dòng)蛋白聚合？ 

答案2：  為了檢查未標(biāo)記的心肌肌動(dòng)蛋白（Cat。＃AD99）的聚合，請(qǐng)點(diǎn)擊此處查看使用過(guò)量未標(biāo)記[心肌]肌動(dòng)蛋白加10％芘標(biāo)記的骨骼肌肌動(dòng)蛋白的聚合方案。芘肌肉肌動(dòng)蛋白本身不會(huì)以該測(cè)定中使用的濃度聚合，因此該反應(yīng)依賴(lài)于未標(biāo)記的心肌肌動(dòng)蛋白（Cat。＃AD99）用于F-肌動(dòng)蛋白形成。以這種方式，芘標(biāo)記的肌肉肌動(dòng)蛋白被吸收并聚合以充當(dāng)用于聚合未標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白的報(bào)道分子，其以更高的濃度存在。

Butler SC，et al。海藻中的pectenotoxins對(duì)各種肌動(dòng)蛋白異構(gòu)體聚合的抑制作用。毒理學(xué)。體外。26,493-499。

Fressinaud C.，et al。軸突細(xì)胞骨架蛋白在體外特異性調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化。神經(jīng)化學(xué)雜志。詮釋。60,78-90。

Orlova A.，et al。肌球蛋白結(jié)合蛋白C的N-末端結(jié)構(gòu)域可以多態(tài)性結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白。J. Mol。細(xì)胞。412,379-386。

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